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Test ELISA
La tecnología de los test ELISA se utiliza habitualmente en los estudios biomédicos. Ayuda en casos de diagnóstico y causas científicas, donde sigue siendo una tecnología analítica muy popular. Es rápida, precisa y fácil de usar. Puede automatizarse. También es segura y bastante barata.
¿Para que se usan los test ELISA?
La prueba ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) es una prueba inmunoenzimática en fase sólida. Su función es la detección y cuantificación de las proteínas que contiene la muestra de ensayo, como los anticuerpos o los antígenos de naturaleza proteica. El método se basa en la formación de enlaces entre el antígeno y el anticuerpo, que hace visible la reacción de color, que se produce gracias a la conjugación con enzimas de inmunoglobulina y sustratos adecuados para ellos.
Procedimiento:
El azulejo se cubre con una capa de antígeno. Posteriormente se añaden algunos anticuerpos, que son específicos para el antígeno y marcados con una enzima correcta y se procede a una incubación . Durante este tiempo los anticuerpos específicos se conectan con el antígeno, y los que no se conectan se van lavando.
La solución sustrato/cromóforo se añade a una baldosa y la enzima está catalizando la reacción. En el afecto podemos detectar el producto coloreado . Al final realizamos una medida espectrofotométrica
¿Cuáles son los tipos de pruebas ELISA? ¿Qué es un ELISA directo?
Existen cuatro tipos o categorías de pruebas ELISA:
ELISA directo: unión de un antígeno a una placa de poliestireno, seguida de un anticuerpo marcado con una enzima que puede reaccionar con el antígeno y un sustrato que puede medirse.
ELISA indirecto: unión de un antígeno a una placa de poliestireno, seguida de un anticuerpo primario o no marcado y, a continuación, un anticuerpo marcado con una enzima que puede reaccionar con el anticuerpo primario y el sustrato.
ELISA sándwich: se fija un anticuerpo de captura en la placa de poliestireno, y a continuación se añade un antígeno que se une o captura específicamente el antígeno. Se añade un segundo anticuerpo, también específico para el antígeno pero diferente del anticuerpo de captura, que “atrapa” el antígeno. A este segundo anticuerpo le sigue un anticuerpo marcado con una enzima específica para el segundo anticuerpo que puede reaccionar con un sustrato que se puede medir.
ELISA competitivo: esta prueba es similar al ELISA en sándwich, pero implica la adición de anticuerpos o proteínas competidoras cuando se añade el segundo anticuerpo. Esto da lugar a una disminución de la señal generada por el sustrato. Esta prueba ofrece resultados buenos y muy específicos.
Ventajas y desventajas
Ventajas
- Alta sensibilidad y especificidad: Las pruebas ELISA suelen detectar antígenos a nivel de picogramos con una alta especificidad mediante el uso de anticuerpos.
- Alto rendimiento: las pruebas ELISA comerciales suelen estar disponibles en formato de placa de 96 pocillos. Pero la prueba puede adaptarse fácilmente a placas de 384 pocillos.
- Facilidad de ejecución: los protocolos son fáciles de seguir y requieren poco tiempo de manipulación.
- Cuantitativo: puede determinar la concentración de antígeno en una muestra.
- Puede analizar diferentes tipos de muestras: suero, plasma, extractos celulares y tisulares, orina y saliva, entre otros.
Desventajas
- Lecturas temporales: la detección se basa en reacciones enzima/sustrato y, por lo tanto, la lectura debe obtenerse en un corto período de tiempo.
- Información limitada del antígeno: información limitada a la cantidad o presencia del antígeno en la muestra.
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