El etiquetado de anticuerpos, o la fijación de una etiqueta específica a un anticuerpo para ayudar a la detección o aislamiento/purificación de una proteína, es una técnica importante. Los anticuerpos marcados son esenciales para los ensayos basados en la inmunidad, como los Western blots, los ELISA, la citometría de flujo, la inmunohistoquímica (IHC) y la inmunofluorescencia (IF). Los anticuerpos marcados también se utilizan para aislar y purificar una sola proteína de una mezcla compleja de proteínas. Los anticuerpos, al igual que otras proteínas, pueden marcarse con pequeñas moléculas, radioisótopos, proteínas enzimáticas y tintes fluorescentes.

¿Qué es el etiquetado de anticuerpos? Un anticuerpo se une a un antígeno para iniciar una respuesta inmunitaria. Algunos anticuerpos se unen a antígenos específicos. Esta reacción constituye la base de las pruebas de identificación. Dicha reacción sólo puede observarse al microscopio mediante un anticuerpo marcado.

Una etiqueta puede ser una enzima, un fluoróforo o el oro coloidal. La enzima puede producir una reacción cromogénica que hace posible la identificación. El microscopio fluorescente se utiliza para ver una etiqueta fluorófora. El microscopio electrónico se utiliza para ver el oro coloidal.

El etiquetado de anticuerpos puede hacerse por dos métodos: Etiquetado directo y etiquetado indirecto. Como su nombre indica, el etiquetado directo utiliza un único anticuerpo primario para el proceso de etiquetado. Este anticuerpo se une covalentemente a una molécula de etiquetado. A continuación, el anticuerpo primario se añade al complejo de antígenos y se incuba.

El anticuerpo primario se une al antígeno específico. El exceso de anticuerpo se lava. La unión de la etiqueta al anticuerpo primario puede provocar una pequeña pérdida de especificidad. El etiquetado indirecto ejerce dos anticuerpos. El anticuerpo primario se utiliza para la identificación y la detección.

El anticuerpo secundario se utiliza para el etiquetado de anticuerpos y la amplificación de la etiqueta. Los anticuerpos secundarios también tienen la propiedad de unirse inespecíficamente a otras moléculas.

Una etiqueta es una molécula que ayuda a la identificación del complejo antígeno-anticuerpo. Para cumplir esta tarea, la etiqueta debe estar unida covalentemente al anticuerpo primario o secundario. El anticuerpo es generalmente una molécula de proteína que está formada por múltiples aminoácidos con un grupo de lisina en cadena. Todo el procedimiento de etiquetado se dirige a este grupo de lisina para fijar la etiqueta. Se utilizan cuatro tipos de enlaces covalentes. El enlace NHS se forma en las etiquetas que contienen esta cadena lateral activa.

En el caso de las etiquetas, que son proteínas o enzimas, se utiliza un reactivo heterobifuncional para la unión. Tanto el anticuerpo como la etiqueta contienen muchas lisinas. Por lo tanto, una de las moléculas de proteína se modifica teniendo un grupo activo X modificado y la otra molécula de proteína se modifica teniendo un grupo activo Y.

Entonces las cadenas laterales de la etiqueta y del anticuerpo modificadas reaccionan para formar el anticuerpo marcado. Los enlaces de carbodiimidas se utilizan para etiquetas como el colorante. Estas etiquetas contienen un grupo carboxilo que reacciona con el grupo amino de los anticuerpos.

El radioinmunodiagnóstico se practica desde 1988. El radioisótopo se utiliza para el etiquetado en este enfoque. Hay muchos números de radioisótopos utilizados. La elección del isótopo varía en función de la aplicación. A grandes rasgos, los anticuerpos se pueden clasificar en cuatro tipos en función de la diana y la acción farmacocinética.

Anticuerpos agonísticos que imitan el ligando endógeno y conducen a la señal de muerte. Anticuerpos bloqueadores que se unen al ligando o modifican el receptor. Anticuerpos que inician las funciones efectoras. Anticuerpos conjugados que se conjugan con sustancias citotóxicas.

La elección de un radionúclido para el marcaje de anticuerpos depende del objetivo y de la aplicación. Las siguientes propiedades son la base de la selección de un isótopo.

La farmacocinética del anticuerpo y el período de semidesintegración del radioisótopo deben ser iguales.

El radioisótopo debe emitir fotones de energía de 120-200 keV para la obtención de imágenes.

Para la obtención de imágenes y la aplicación de la terapia, se utilizan isótopos que emiten radiación gamma. Para la terapia también se utilizan isótopos que emiten radiación alfa y beta.

Los halógenos y los cationes metálicos se utilizan para el radiomarcado. La radioiodinación de las proteínas es una reacción de sustitución electrofílica. El radiomarcador se une covalentemente al residuo de tirosina de la molécula de proteína. En el caso del radiomarcaje por cationes metálicos, el anticuerpo debe ser modificado por un agente quelante.

El ácido pentético (DTPA, ácido dietilentriaminopentaacético) se utiliza como agente quelante. Los anticuerpos conservan su inmunorreactividad para una o dos moléculas de ácido por un solo anticuerpo. En este método se debe mantener estrictamente la relación ácido-proteína. La reactividad del anticuerpo disminuye con el aumento de la proporción ácido-anticuerpo.

Preparación de los anticuerpos para el marcaje: Los anticuerpos deben ser purificados a partir de una muestra de suero. Los anticuerpos se almacenan en un pH neutro. La solución proteica se almacena a 10mg/mL.

Preparación de los inmunoconjugados: Mezclar el derivado de ácido pántico y la solución de anticuerpos en la proporción de 1:5. Dejar reaccionar durante 2 h a temperatura ambiente. Ultracentrifugar la muestra y eliminar el ácido pentético no reaccionado.

Fijación del DTPA: Preparar una solución de anticuerpos a 5 mg/mL en un tampón de carbonato sódico. Disolver el anhídrido cíclico de DTPA en dimetilsulfóxido anhidro. Añadir 5molar equivalentes de anhídrido cíclico a 1 mL de la solución de anticuerpos. Dejar que la reacción se produzca a temperatura ambiente durante 2 horas. Ultracentrifugar la mezcla para eliminar el DTPA sin reaccionar.

Radiomarcado con itrio-90 o indio-111: Descongelar un volumen adecuado de solución de anticuerpo-DTPA. Añadir la cantidad deseada de cloruro de indio/cloruro de itrio y golpear suavemente para mezclarlos. Dejar que la reacción proceda a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Terminar la reacción añadiendo DTPA a la solución.

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Las características del “Mouse IFN-beta ELISA”

• Los emparejamientos optimizados de anticuerpos de captura y detección con las concentraciones recomendadas ahorran mucho tiempo de desarrollo
• Se proporcionan protocolos de desarrollo para guiar la optimización del ensayo
• El ensayo puede adaptarse a sus necesidades específicas
• Alternativa económica a los kits completos

SOCS1 es un miembro de la familia de los inhibidores de STAT (SSI), también conocidos como supresores de la señalización de citoquinas (SOCS). Los miembros de la familia SSI son reguladores negativos de la señalización de citoquinas. SOCS1 funciona a la salida de los receptores de citoquinas y participa en un bucle de retroalimentación negativa para atenuar la señalización de las citoquinas.

Los anticuerpos policlonales se producen inmunizando a los animales con un péptido sintético correspondiente a los residuos que rodean a Ala156 de SOCS1 humana. Los anticuerpos se purificaron mediante cromatografía de afinidad de proteínas A y péptidos.

Varios proveedores ofrecen antibodies anti-SLC1A5. Este gen codifica la proteína “solute carrier family 1 member 5” en humanos y también puede ser conocido como ASCT2, AAAT, ATBO, M7V1, neutral amino acid transporter B(0), y ATB(0). Estructuralmente, la proteína tiene una masa de 56,6 kilodaltons. Basándose en el nombre del gen, también se pueden encontrar ortólogos caninos, porcinos, de mono, de ratón y de rata.