El Radioinmunoensayo (RIA) es un tipo de inmunoensayo o método radioinmunométrico que se basa en la formación específica de los complejos antígeno-anticuerpo (Ag-Ac) lo que le dota de una gran especificidad unido a la sensibilidad de los métodos radiológicos (Isótopos radiactivos).

El Radioinmunoensayo (RIA) consiste en una técnica de laboratorio de análisis clínico. Usa isótopos radioactivos, es in vitro, es decir, se extrae la sangre del paciente y es analizada para ver sustancias.

El antígeno objetivo se marca radioactivamente y se une a sus anticuerpos específicos (hay que añadir una cantidad limitada y conocida del anticuerpo específico). A continuación, se añade una muestra, por ejemplo de suero sanguíneo, para iniciar una reacción competitiva de los antígenos marcados de la preparación, y de los antígenos no marcados de la muestra de suero, con los anticuerpos específicos.

La competencia por los anticuerpos liberará una cierta cantidad de antígeno marcado. Esta cantidad es proporcional a la relación entre el antígeno marcado y el no marcado. A continuación, se puede generar una curva de unión que permite deducir la cantidad de antígeno en el suero del paciente.

Es una técnica que nace en los años 60-70, propiciando un gran avance de la endocrinología. Es una técnica muy sensible, mide pequeñas cantidades de sangre.

El Radioinmunoensayo (RIA) se basa en el principio de todos los inmunoensayos, que es el reconocimiento de un antígeno presente en una muestra por parte de anticuerpos dirigidos contra este antígeno.

Esto significa que, a medida que se incrementa la concentración de antígeno no marcado, una mayor cantidad de éste se une al anticuerpo, desplazando a la variante marcada. Los antígenos unidos se separan entonces de los no unidos y se mide la radiactividad de los antígenos libres que quedan en el sobrenadante. Se puede generar una curva de unión utilizando un estándar conocido, lo que permite derivar la cantidad de antígenos en el suero del paciente.

El radioinmunoanálisis es una técnica de ensayo antigua, pero sigue siendo un ensayo muy utilizado y sigue ofreciendo claras ventajas en términos de simplicidad y sensibilidad.

• Antisuero específico del antígeno a medir
• Disponibilidad de una forma marcada radiactiva del antígeno
• Un método en el que el trazador unido al anticuerpo pueda separarse del trazador no unido
• Un instrumento para contar la radiactividad

Suelen aplicarse etiquetas de 125-I, aunque también se han utilizado otros isótopos como C14 y H3. Por lo general, el antígeno marcado con radiofrecuencia de alta actividad (125-I) se prepara mediante la yodación del antígeno puro en su(s) residuo(s) de tirosina por métodos de cloramina-T o peroxidasa y, a continuación, se separa el antígeno marcado con radiofrecuencia del isótopo libre mediante filtración en gel o HPLC. Otros componentes importantes de la RIA son el anticuerpo específico contra el antígeno y el antígeno puro para utilizarlo como estándar o calibrador.

Se aplican técnicas de doble anticuerpo, carbón vegetal, celulosa, cromatografía o fase sólida para separar el antígeno unido y el libre radiomarcados. La más utilizada es la técnica de doble anticuerpo combinada con polietileno. La fracción ligada o libre se cuenta en un contador gamma.

Al mismo tiempo, se genera una curva de calibración o estándar con muestras de concentraciones conocidas de los estándares no marcados. La cantidad de antígeno en una muestra desconocida puede calcularse a partir de esta curva.

La sensibilidad puede mejorarse disminuyendo la cantidad de antígeno y/o anticuerpo marcado radiactivamente. La sensibilidad también puede mejorarse mediante la llamada incubación de desequilibrio. En este caso, el antígeno marcado radiactivamente se añade después de la incubación inicial del antígeno y el anticuerpo.

El anticuerpo debe ser específico para el antígeno investigado (otros antígenos no deben presentar reacción cruzada con el anticuerpo). Si se observa alguna reactividad cruzada, se aconseja la selección de un anticuerpo diferente o es necesario purificar el anticuerpo del antígeno con reacción cruzada mediante cromatografía de afinidad.