Mucha personas se preguntan ¿Qué es un Nanoanticuerpo? Los nanoanticuerpos, son un tipo de anticuerpos derivados de camélidos, siendo mucho más pequeños que los habituales, cada uno de ellos es un conglomerado de dos cadenas pesadas y dos ligeras, plegados de manera intrincada y ligados a azúcares complejos. Es decir, los nanoanticuerpos son diminutos fragmentos VHH de unión a antígeno producidos de forma recombinante, derivados del anticuerpo IgG de cadena pesada de alpaca (HCAb).

El dominio VHH representa el fragmento de anticuerpo más pequeño necesario para unirse específicamente a un antígeno con una afinidad excepcionalmente alta.

En resumen, ¡casi cualquier forma!

Los nanoanticuerpos vienen en una variedad de formatos. Se crían contra una gama bastante diversa de antígenos, por lo que son herramientas muy versátiles, capaces de emplearse en una gran variedad de situaciones diferentes.

Los usos más comunes de los nanoanticuerpos son experimentos con los que probablemente ya esté familiarizado, como la inmunoprecipitación o la microscopía de fluorescencia.

También hay un puñado de aplicaciones en las que el uso de un nanoanticuerpo es factible, pero el uso de un anticuerpo convencional sería poco práctico o imposible.

• Más consistente
• Mayor afinidad
• Más fáciles de usar

Los nanocuerpos se ofrecen en una variedad de formatos, incluyendo Nano-Traps, Nano-Boosters y Chromobodies® .

Las nano-trampas son nano-cuerpos que han sido conjugados con agarosa o perlas magnéticas para facilitar inmunoprecipitaciones más limpias, rápidas y simples.

Las nano-trampas están disponibles en una variedad de formatos y se dirigen a una variedad de etiquetas comunes, incluyendo la proteína verde fluorescente (GFP), la proteína roja fluorescente (RFP), Myc, GST y MBP.

También se dispone de nano-trampas para la metiltransferasa del ADN (Dnmt-1), p53 y PARP-1 para la inmunoprecipitación de proteínas no etiquetadas y expresadas endógenamente.

Las nano-trampas le permiten realizar experimentos de IP con un rendimiento excepcionalmente alto y sin la contaminación de las cadenas pesadas o ligeras de los anticuerpos.

Las nano-trampas mejoran significativamente los protocolos convencionales de IP, veremos algunas mejoras:

• Más rápido (aproximadamente la mitad del tiempo requerido para una IP de anticuerpos)
• Más limpios (sin contaminación de anticuerpos de cadena pesada o ligera)
• Más consistente (reactivos recombinantes para la misma interacción cada vez)
• Mayor rendimiento (constantes de afinidad de picomolar a nanomolar para GFP y RFP-traps®)

Para facilitar la mayor versatilidad en la metodología de IP, todas las nano-trampas vienen conjugadas con perlas de agarosa, perlas ferromagnéticas o perlas de agarosa/magnéticas.

Los investigadores de EE.UU. y Europa Occidental reciben las trampas de GFP y RFP al día siguiente de su compra en antibodies-online.

Los Nano-Boosters utilizan el poder del nano-cuerpo para mejorar, modular o reactivar la señal fluorescente débil de una proteína fluorescente.

Un Nano-Booster está compuesto por un nano-cuerpo, dirigido a GFP o RFP, y conjugado con un colorante ATTO ultra-brillante.
Las propiedades fluorescentes naturales de la GFP se ven reforzadas por el colorante ultrabrillante ATTO-488 acoplado al ABIN509419 GFP-Booster®.

Los colorantes ATTO fueron elegidos específicamente para su uso con el Nano-Booster debido a su señal excepcionalmente brillante, su fotoestabilidad, la mejor de su clase, y su estrecho desplazamiento de Stokes.

Las técnicas de imagen de próxima generación, como la microscopía de superresolución, requieren sondas fluorescentes brillantes y fotoestables.

Los Nano-Boosters pueden proporcionar el “refuerzo de señal” necesario para que las proteínas fluorescentes como la GFP sean brillantes y estables para la microscopía de súper resolución.

Los Chromobodies® son herramientas novedosas para el etiquetado fluorescente intracelular de células vivas.

Los Chromobodies® son proteínas de fusión que contienen un nanobody dirigido a su proteína de interés y una proteína fluorescente brillante y fotoestable.

Dado que los nanocuerpos se producen a partir de ADN recombinante, puede generar Chromobodies® directamente, justo dentro de la célula que desea marcar. No hay que complicarse con protocolos de fijación o etiquetado engorrosos, frustrantes o que requieren mucho tiempo.

Simplemente comience con el plásmido Chromobody® apropiado, transféctelo en una línea celular compatible y utilice el inmunoetiquetado intracelular persistente en células vivas.

Chromobodies® utiliza sus propias células para producir los nanocuerpos que marcarán su proteína de interés.

No son necesarios ni la fijación ni los pasos adicionales de tinción. Por fin, el inmunomarcaje intracelular en células vivas es una estrategia viable.

Los nanocuerpos también son llamados anticuerpos de dominio simple o anticuerpos VHH debido a que consisten únicamente en un dominio variable (VHH) de la cadena pesada de un anticuerpo. Los nanocuerpos son péptidos de aproximadamente 110 aminoácidos de longitud.

Los dominios VHH poseen cuatro regiones marco (FR) y tres regiones hipervariables (HV) o regiones determinantes de la complementariedad CDR. Los CDRs o HV poseen una alta proporción de variabilidad de aminoácidos en una posición, y son las regiones que intervienen en la unión al antígeno, ya que entran en contacto con la superficie de éste.

El VHH presenta sustituciones de cuatro aminoácidos en la región de FR2, en las posiciones 37, 44, 45, y 47. La FR2 del VH convencional no presenta estas sustituciones y está involucrado con la formación de la interfaz hidrofóbica con el dominio VL

Las principales aplicaciones en las que se estudia a los nanoanticuerpos, es el tratamiento de enfermedades en humanos por medio de la interacción con enzimas tóxicas específicas o el bloqueo de interacciones moleculares.

En el campo de la oncología se emplean VHH en la interrupción de interacciones moleculares o la lisis de células oncogénicas. Para destruir células cancerígenas, el VHH se une al antígeno carcinoembrionario que sirve de marcador para la β-lactamasa, convirtiendo a un profármaco no tóxico en un fármaco tóxico para la célula cancerosa

La aplicación biotecnológica de nanoanticuerpos es potencialmente viable, un ejemplo es el marcaje de antígenos en células vivas, por medio de la aplicación de nanoanticuerpos fluorescentes específicos hacia proteínas endógenas.

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