En este articulo hablaremos profundamente sobre el Panel de marcadores de Cúmulos de diferenciación (CD), CD es la abreviatura de “Cúmulo de diferenciación”. Las moléculas CD son marcadores de la superficie celular muy útiles para la identificación y caracterización de los leucocitos y de las diferentes subpoblaciones de leucocitos. El taller HLDA (Human Leukocyte Differentiation Antigens), que comenzó en 1982, desarrolló la nomenclatura CD y ha mantenido la lista de marcadores CD desde entonces. La idea inicial de la nomenclatura CD fue la clasificación de muchos anticuerpos monoclonales diferentes contra moléculas de la superficie celular de los leucocitos que habían sido generados por diferentes laboratorios de todo el mundo.

El número de marcadores de CD ha crecido constantemente y se ha ampliado a otros tipos de células. Hoy en día hay más de 320 grupos de CD descritos en humanos.

Los marcadores de cúmulos de diferenciación (CD) son especialmente útiles para la identificación de la población de leucocitos mediante citometría de flujo. Nuestras páginas de recursos Protocolo general de citometría de flujo y ¿Qué es la citometría de flujo? ofrecen una breve introducción a la citometría de flujo.

La gran ventaja de la citometría de flujo es que permite la detección simultánea de varios marcadores en una sola célula al mismo tiempo. Con un citómetro de flujo moderno se pueden medir fácilmente de 8 a 10 colores diferentes en una muestra, los citómetros más avanzados pueden incluso medir hasta 18 canales a la vez.

Cuando se utiliza la citometría de flujo para determinar una determinada población de leucocitos, se suele utilizar una combinación de varios marcadores de Cúmulos de diferenciación para determinar una subpoblación, ya que un solo marcador no suele definir toda la población.

Normalmente, los investigadores generan árboles de gating cuando evalúan los experimentos de citometría de flujo.

Un ejemplo muy ilustrativo es la distribución de CD8. Aunque el CD8 es el marcador más prominente y el que da nombre a las células T citotóxicas CD8 positivas (CD8+), también lo expresan las células asesinas naturales (células NK) y las células dentríticas (DC). Si se separan todas las células CD8+ de una población de leucocitos de una muestra de sangre, la población separada estaría formada por células T CD8+, células NK y Cúmulo de Diferenciación(CD).

En el siguiente experimento se determinó la proporción de células T helper CD4+ frente a células T citotóxicas CD8+. En primer lugar, se separaron todas las células CD45+ (marcador general de leucocitos) de la muestra de sangre periférica (puerta 1).

En el siguiente panel, todas las células CD45+ de la Puerta 1 se sometieron a un blot para determinar su expresión de CD3. CD3 es el marcador de células T más común, que sólo se expresa en las células T y no en otras células CD8+, como las células NK o DC. La selección de las células CD3+ garantiza que no se contabilicen como células T CD8+ células CD3- sino células CD8+ (por ejemplo, células NK o DC).

La población de células T CD3+ puede diferenciarse además en células T CD8+ citotóxicas y en células T helper CD4+, como se muestra en el panel 2, en el que las células CD3+ de la puerta 2 se sometieron a un blot para determinar su expresión CD4 y CD8. Las células T helper CD4+ CD8- se encuentran en el cuadrante superior izquierdo y las células T citotóxicas CD4- CD8+ se muestran en el cuadrante inferior derecho del panel 3.

Si fuera necesario, un investigador interesado en diferentes poblaciones de T helper, como TH1, TH2, TH9, TH17 y Treg, teñiría los respectivos marcadores extra o intracelulares de esas subpoblaciones.

Ejemplo de cómo se utilizan los marcadores CD para definir las poblaciones celulares en la citometría de flujo. La imagen muestra el árbol de Gating de las células T CD4+ y CD8+. En el panel de la izquierda, los leucocitos (células CD45+) se agrupan en la puerta 1. En el panel del medio sólo se muestran las células de la puerta 1 que son todos los leucocitos de la muestra. En este panel los linfocitos T (CD3+) son gatedos en la puerta 2. El panel derecho muestra las células T CD3+ y separa las células T Helper CD4+ y CD8- (cuadrante superior izquierdo) y las células citotóxicas C8+ y Cd4- (panel inferior derecho). Cortesía del Dr. F.M. Hess, Boisvert Lab, JABSOM, Universidad de Hawaii

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