El control de isotipos son anticuerpos primarios que carecen de especificidad para la diana, pero que coinciden con la clase y el tipo del anticuerpo primario utilizado en la aplicación. Los controles de isotipo se utilizan como controles negativos para ayudar a diferenciar la señal de fondo no específica de la señal del anticuerpo específico.

En términos sencillos, el control de isotipos ayudan a distinguir la señal de fondo no específica de la señal de anticuerpos específicos.

Los controles de isotipo proporcionan un método especialmente fiable que diferencia eficazmente entre especificidad y fondo en una serie de ensayos de desarrollo de fármacos.

Como regla general, intente que las siguientes propiedades coincidan con el anticuerpo primario:

• Utilice un control de isotipo que proceda de la misma especie huésped que el anticuerpo primario.
• Utilice el mismo isotipo y subclase. Aunque no se discute aquí, las cadenas ligeras de los anticuerpos también comprenden distintas clases de isotipo, y éstas también deben tenerse en cuenta al elegir un control de isotipo.
• Afortunadamente, esta información será de fácil acceso en las hojas de datos de su anticuerpo primario y de los posibles controles de isotipo.
• Cuando utilice anticuerpos primarios conjugados, elija controles de isotipo con exactamente el mismo formato de conjugación, por ejemplo, biotinilado, conjugado con FITC, conjugado con PE.
• Tenga en cuenta que cuando se utilicen conjugados fluorocromos, un control de isotipo con un perfil espectral similar no servirá.

Además, las proporciones de conjugado-anticuerpo deben ser siempre iguales ‘entre los pares de anticuerpos primarios y controles de isotipo.

Además de elegir controles de isotipo con propiedades similares a las de su anticuerpo primario, también es imperativo que utilice exactamente las mismas condiciones de ensayo al hacer las comparaciones, por ejemplo, la concentración de anticuerpos, los tiempos y temperaturas de incubación, las condiciones de bloqueo y lavado y los métodos de detección deben ser idénticos.

Los controles de isotipo se utilizan habitualmente en experimentos de citometría de flujo e inmunohistoquímica (IHC). Para estas aplicaciones y otros inmunoensayos, incluyendo ELISAs, Western Blotting e Inmunocitoquímica (ICC), un anticuerpo de control de isotipo también puede servir como agente de bloqueo o recubrimiento.