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ADN ramificado (ADNb)

Tecnología de ADN ramificado (ADNb)

Introducción

El ensayo de ADN ramificado (ADNb) proporciona una herramienta única y potente para la cuantificación fiable de las moléculas de ácido nucleico. Fundamentalmente diferente de los métodos de amplificación de diana como la PCR, el ensayo de bADN mide directamente las moléculas de ácido nucleico a niveles fisiológicos mediante la amplificación de la señal del reportero, en lugar de replicar las secuencias diana como medio de detección, y por lo tanto evita los errores inherentes a la extracción y amplificación de las secuencias diana.

El ensayo de ADNb emplea una amplificación lineal de la señal utilizando sondas de oligonucleótidos sintéticos y moléculas de ADNb, y puede medir con exactitud y precisión entre 500 y 10.000.000 de moléculas aproximadamente. Los nuevos avances en la tecnología de ADNb incluyen la adición de moléculas preamplificadoras y la incorporación de nuevos nucleótidos, isoC e isoG, en las secuencias de sondas de oligonucleótidos para mejorar aún más la señal y reducir el ruido causado por la hibridación no específica de los componentes del ensayo de ADNb. Estas mejoras han ampliado el límite de detección cuantitativa del ensayo de ADNb a tan sólo 50 moléculas.

Historia de la tecnología del ADN Ramificado (ADNb)

Muy adecuado para el uso rutinario en un entorno clínico o de investigación, el ensayo de ADNb se ha aplicado con éxito en una serie de áreas, incluyendo el pronóstico y el seguimiento de los pacientes con enfermedades virales. Al proporcionar un medio fiable para la cuantificación directa de la carga viral en muestras clínicas, se han desarrollado ensayos de ADNb para medir el ADN del virus de la hepatitis B, el ARN del virus de la hepatitis C, el ARN del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 y el ADN del citomegalovirus.

Con el diseño personalizado de sondas de oligonucleótidos, las aplicaciones potenciales del ensayo de ADNb van mucho más allá de la cuantificación de ácidos nucleicos virales. Mediante la creación de sondas de oligonucleótidos para secuencias específicas de moléculas de ácido nucleico objetivo, el ensayo de ADNb se ha adaptado a una amplia variedad de aplicaciones.

Por ejemplo, los investigadores han diseñado sondas para que el ensayo de ADNb mida los niveles de ARNm celular. Esto ha demostrado ser un enfoque fructífero para una serie de aplicaciones de investigación, incluyendo el seguimiento de los cambios en los niveles de ARNm de citoquinas en poblaciones de pacientes sanos e inmunocomprometidos, la investigación de los patrones de empalme de la insulina, y la evaluación de la inducción de genes de estrés para aplicaciones de toxicología molecular.

Dada su versatilidad, facilidad de uso y alto nivel de rendimiento, el ensayo de ADNb se está convirtiendo rápidamente en el método de elección para la cuantificación de ácidos nucleicos

Esquema

El ensayo de ADNb utiliza un formato de microplaca de 96 pocillos y se basa en una serie de reacciones de hibridación específicas y en la detección quimioluminiscente de las sondas hibridadas. En la superficie de cada micropocillo hay sondas de “captura” que contienen una secuencia de nucleótidos específica.

Estas sondas de captura se unen a un subconjunto de “sondas objetivo” que se unen a secuencias de nucleótidos específicas en la molécula de ácido nucleico objetivo. Esta serie de hibridaciones ancla la molécula de ácido nucleico diana a la superficie del micropocillo. La detección del ácido nucleico diana y la amplificación de la señal se realiza mediante otra serie de hibridaciones.

Un segundo subconjunto de sondas objetivo une la molécula de ácido nucleico objetivo a moléculas amplificadoras de ADNb. Con la adición de moléculas preamplificadoras para proporcionar una capa adicional de mejora entre las sondas diana y las moléculas amplificadoras de ADNb, se puede lograr una amplificación de la señal aún mayor. Cada molécula amplificadora de ADNb ha sido diseñada para contener 15 brazos, cada uno de los cuales contiene tres sitios de unión para “sondas de etiqueta” conjugadas con fosfatasa alcalina.

Se genera una señal quimioluminiscente al introducir un sustrato de dioxetano que es activado por la fosfatasa alcalina. Esta señal se cuantifica fácilmente contando el número de fotones emitidos en un luminómetro. El ensayo de ADNb es intrínsecamente cuantitativo, ya que el número de fotones emitidos está directamente relacionado con la cantidad de ácido nucleico objetivo en la muestra.

socs1 antibody

SOCS1 es un miembro de la familia de los inhibidores de STAT (SSI), también conocidos como supresores de la señalización de citoquinas (SOCS). Los miembros de la familia SSI son reguladores negativos de la señalización de citoquinas. SOCS1 funciona a la salida de los receptores de citoquinas y participa en un bucle de retroalimentación negativa para atenuar la señalización de las citoquinas.

Los anticuerpos policlonales se producen inmunizando a los animales con un péptido sintético correspondiente a los residuos que rodean a Ala156 de SOCS1 humana. Los anticuerpos se purificaron mediante cromatografía de afinidad de proteínas A y péptidos.

SLC1A5 antibody

“SLC1A5 antibody” son anticuerpos que detectan ASCT2 pueden ser utilizados en varias aplicaciones científicas, incluyendo Western Blot, Inmunohistoquímica (parafina), Inmunoprecipitación, Inmunocitoquímica y Citometría de flujo. Los “SLC1A5 antibody” están dirigidos a ASCT2 en muestras de humanos, ratas y ratones. Nuestros anticuerpos policlonales contra ASCT2 han sido desarrollados en Conejo. Estos anticuerpos han sido verificados mediante expresión relativa para confirmar su especificidad frente a ASCT2. Los anticuerpos SLC1A5 ayudan a encontrar el anticuerpo de ASCT2 que se ajuste a sus necesidades.

mucin 2 antibody

“Mucin 2 antibody” sos anticuerpos que detectan MUC2 pueden usarse en varias aplicaciones científicas, incluyendo Inmunohistoquímica (parafina), Inmunocitoquímica, Citometría de flujo, Inmunohistoquímica y Western Blot. “Mucin 2 antibody” se dirigen a MUC2 en muestras de humanos, ratones y ratas. Nuestros anticuerpos policlonales, monoclonales recombinantes y monoclonales contra MUC2 se desarrollan en Conejo y Ratón. Encuentre el anticuerpo MUC2 que se ajuste a sus necesidades.

  • Mucin 2/MUC2 Anticuerpo (Ccp58) es un anticuerpo monoclonal de ratón IgG
  • Mucin 2/MUC2 Anticuerpo (Ccp58) es recomendado para detectar Mucin2 de mouse, rat y human origen, mediante IF y IHC(P)
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