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Diferencias entre qPCR y dPCR
En este artículo discutiremos las diferencias entre qPCR y dPCR en aras de la claridad. La amplificación del ADN por PCR es actualmente una técnica de laboratorio fundamental, y las innovaciones siguen ampliando su uso en los laboratorios de investigación y en las clínicas. La PCR cuantitativa (qPCR) permite la cuantificación relativa del ADN objetivo y es un método fiable y bien establecido para verificar la presencia o ausencia de determinadas secuencias (por ejemplo, la mayoría de las pruebas basadas en la PCR para detectar coronavirus utilizan la qPCR). Otra forma de PCR, la PCR digital (dPCR) o la PCR digital en gotas (ddPCR), utiliza una química similar para detectar secuencias de ADN.
¿Qué es la PCR en tiempo real (qPCR)?
La PCR en tiempo real o cuantitativa (qPCR) utiliza moléculas informadoras fluorescentes para cuantificar los productos amplificados. Al igual que en la PCR convencional, se amplifica una plantilla de ADN, ADNc o ARN, pero en cada ciclo se controlan las señales fluorescentes para una cuantificación relativa o absoluta. Esta técnica es útil para muchas áreas de investigación, como el análisis de la expresión génica, el genotipado, el análisis de microARN, el análisis de la variación genética y el análisis de proteínas.
¿Qué es la PCR digital (dPCR)?
La PCR digital (dPCR) se está convirtiendo en la tecnología complementaria a la PCR en tiempo real para la cuantificación precisa de los ácidos nucleicos, ya que puede ofrecer una alta sensibilidad y un rendimiento robusto frente a los inhibidores. La PCR digital reúne una amplia gama de aplicaciones de investigación, ofreciendo una fiabilidad inigualable para la cuantificación de objetivos raros, variaciones en el número de copias (CNVs), expresión de genes y más.
- Cuantificación de genes con baja abundancia o pequeñas diferencias
- Cuantificación absoluta
- Variación del número de copias del gen (CNV)
- Determinación del número de copias del vector (CNV) y detección de retrovirus competentes para la replicación (RCR) o lentivirus (LCL) en el contexto de la terapia celular adoptiva
- Detección de eventos raros, como mutaciones de genes cancerígenos en tejidos o biopsias líquidas.
Diferencias entre qPCR y dPCR
La qPCR es un método de uso frecuente para el cribado de grandes poblaciones de células y puede proporcionar un genotipado rápido mediante HRM. La dPCR se recomienda para analizar la variación del número de copias, ya que puede detectar con precisión la variación de copias con menos repeticiones que la qPCR.
Ventajas qPCR
- Amplio rango dinámico de detección
- Bajo coste experimental por muestra
- Alto rendimiento de las muestras
Ventajas dPCR
- No depende de las curvas estándar ni de las muestras de referencia
- Alta tolerancia a los inhibidores biológicos y a la preparación de muestras
- Mejor rendimiento para aplicaciones que requieren mayor sensibilidad y precisión
Cuando es necesario detectar eventos raros
Una aplicación particularmente buena para la dPCR es la detección de eventos raros en los ensayos clínicos. Biocompare habló con Gary Lee, científico principal de Sangamo, Inc. sobre la adopción de la dPCR por parte de la empresa a finales de 2011. Sangamo está especializada en terapia génica y diseña nucleasas que unen el ADN a la proteína de dedo de zinc (ZFP), lo que permite personalizar la expresión génica. Una de estas terapias, que actualmente se encuentra en dos ensayos clínicos de fase II, podría proporcionar algún día una cura funcional para el VIH, ofreciendo una alternativa a los tratamientos farmacológicos convencionales.
RT-PCR o qPCR
Los avances en biotecnología han permitido descubrir diversas formas de satisfacer la demanda de trasplantes de órganos a lo largo de los años. En el pasado, una persona que donaba voluntariamente un órgano inmediatamente después de su muerte a un paciente necesitado sólo podía desencadenar la operación de trasplante. El estudio y la investigación continuos de los biólogos condujeron al descubrimiento de las células madre.
Las células madre son células extraídas del ADN de un embrión, que servirán como fuente para la regeneración de células que serán esencialmente un clon del órgano del que se extrajo el ADN. Aunque los activistas de los derechos humanos presionan para que se ponga fin a estos procedimientos, las operaciones realizadas con éxito han demostrado la eficacia de los avances de las células madre en el trasplante de órganos.
Sin embargo, antes de poder apreciar y comprender plenamente las células madre, es necesario familiarizarse con las diferentes terminologías asociadas a este descubrimiento científico. El cultivo de células madre tiene que ver con el ADN y su codificación. Por lo tanto, es crucial para los estudiantes o cualquier persona interesada en este campo hacer la distinción entre RT-PCR y qPCR.
